生物制药纯化工艺中，总会碰到性质比较接近、较难分离的分子。如何选择合适的填料应用，已成为纯化小伙伴的必备技能。百林科“六边形战士”羟基磷灰石填料，适用于不同纯化应用领域的各个阶段，实现一切不可能。
羟基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2]是一种无机纯相层析介质，高温焙烧成球体，其晶体结构与骨羟基磷灰石相同，且球体结构稳定，粒径均匀。
► 特殊的分离特性，可同时实现阳离子交换和钙金属亲和两种分离机制
► 增加使用寿命
► 高动态结合载量
► 良好的批次重复性
独特的分离机制和选择性，使羟基磷灰石成为下游工艺中不可或缺的层析介质。本文将列举羟基磷灰石纯化不同生物分子的案例，可用于捕获、中度纯化或精纯等不同阶段，对宿主蛋白(HCP)、二聚体、宿主核酸(HCD)、rProtein A等呈现较好的去除效果。
CHT在纯化应用上的选择
CHT多领域应用案例介绍
1 抗体应用案例
✦ 样品信息：双抗阴离子流穿液
✦ 层析柱：10*250 mm，20 ml
✦ Buffer A: 5mM Na2SO4, 0.1M NaCl, pH 6.8
✦ Buffer B: 5mM Na2SO4, 1M NaCl, pH 6.8
图2：BaronCHT type I ，40μm双抗洗脱峰
表1：数据汇总
小结：BaronCHT 填料对于聚集体和HCP均有去除能力，且回收率满足预期。
2 重组因子类对照案例
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| 图3：百林科 II型 洗脱图谱 | 图4：进口友商 II型洗脱图谱 |
表2：数据汇总
小结：较进口友商同步对照，性能表现相当。
3 mRNA应用案例
推荐测试条件
✦ Column: CHT II型
✦ Buffer A：5mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2, pH 7.0
✦ Buffer B：500mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2 ，pH 7.0
✦ Eluction: 0~100%B 10CV
图51：mRNA洗脱图谱
小结：CHT可应用于mRNA的捕获，对于LC编码的mRNA有较好的回收率和纯度预期。
4 AAV应用案例
推荐测试条件
✦ Column: CHT I型
✦ Buffer A：5mM PB，0.15M NaCl，2 mM CaCl2, pH 7.2
✦ Buffer B：500mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2 ，pH 7.2
✦ Eluction: 0~100%B 10CV
图62：AAV应用数据
小结：CHT I型填料在AAV载体有不错应用表现，Buffer条件中加入钙离子可以有效提高AAV载体的回收率。
SUMMARY
尽管羟基磷灰石作为“六边形战士”功能很多，但是大家在使用过程中要注意缓冲液pH不能低于6.5，且溶液中不能含有柠檬酸或 EDTA组分，避免导致羟基磷灰石降解。近期，我们也会针对羟基磷灰石使用过程中的各类问题进行梳理解答，欢迎继续关注百林科“纯化小技巧”系列。
参考文献：
1. Cui T, Fakhfakh K, Turney H, et al.Comprehensive studies on building a scalable downstream process for mRNAs to enable mRNA therapeutics. Biotechnol.Prog. 2023;39(1):e3301. doi:10.1002/btpr.3301
2. Mikako W , Naoya U, Guillermo P, et al. Large-scale purification of functional AAV particles packaging the full genome using short-term ultracentrifugation with a zonal rotor. Gene Therapy.
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