如果您采用真核表达系统，需要将发酵液直接上柱纯化；亦或是样品中含有EDTA等还原剂，该如何应对？百林科全新一代亲和填料Ni Chromstar Excel助您快速通关！这款产品耐受100mM EDTA，适用于真核分泌表达的His标签蛋白纯化，众多优势如虎添翼。
关于His标签
His标签由多个组氨酸残基构成(6个最为常见)，由于组氨酸上的N原子能够与某些过渡金属离子形成配位键，利用这一特性，可以使用含有金属离子配基的填料来捕获和纯化His标签重组蛋白。其特点如下：
☑️ 分子量小，基本不影响蛋白质的结构和功能。
☑️ 组氨酸的咪唑环结构，可以结合二价金属离子，咪唑和组氨酸标签竞争性的结合在二价金属离子上，加入高浓度的咪唑即可将组氨酸标签蛋白洗脱下来。
☑️ 具有成本低、易表达等特点，是目前最为常用的蛋白标签。
镍柱亲和层析原理
通常大家所接触的IDA、NTA和TED的不同螯合形式，就是基于镍离子的不同螯合策略实现。镍离子为六价，IDA偶联需要占用其三个位点，还剩余三个位点结合His标签；第二种偶联方式NTA则是占据镍离子的四个位点，剩余两个位点结合His标签；而第三种方式TED偶联则需要占据五个位点，剩余1个位点结合His标签。
占据位点越多则镍离子被抓的越“牢固”，载量会相应的降低，若蛋白样品中有高浓度的螯合剂如EDTA等，则需要选择TED偶联的镍填料，减少镍离子的脱落。
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| IDA | NTA | TED |
百林科在标签蛋白纯化领域拥有种类广泛、质量优异的Ni系列产品。今天，我们将为大家重点介绍百林科层析填料新品——Ni Chromstar Excel。
这是一款亲和层析介质，将过渡金属离子 Ni2+ 预先螯合在以 TED为配基的 Chromstar 基架上制成。 该层析介质利用 Ni2+ 与蛋白质上某些氨基酸(主要是组氨酸)的侧链之间的相互作用，实现含有与不含有 这些氨基酸、含有这些氨基酸数量多与少的蛋白质的分离纯化，具有明显优势：
☑️ 耐受 100 mM EDTA
☑️ 应用于分泌真核培养液上清中的组氨酸蛋白的捕获或纯化
☑️ >10 mg 组氨酸标签蛋白 /ml 层析介质
☑️ 耐受碱洗，无需脱镍挂镍，有效避免交叉污染
☑️ 一步纯度可达90%以上
☑️ 较好的批间一致性
图1: Ni Chromstar Excel系列产品
应用案例--
含100 mM EDTA的耐受测试
测试条件
• 样品信息：含100 mM EDTA的His蛋白上清液
• 层析柱：0.77*10 cm，4.7ml
• Buffer A: 20mM PB, 0.5M Nacl, 20mM 咪唑
• Buffer B: 20mM PB, 0.5M NaCl, 500mM 咪唑
图2：Ni Chromstar Excel 层析图谱
图3：Ni Chromstar FF层析图谱
图4：Ni Chromstar Excel胶图
图5：Ni Chromstar FF胶图
图6：使用后，Ni Chromstar Excel(左侧)颜色无变化，Ni Chromstar FF(右侧)蓝色基本消失
表1：数据汇总
SUMMARY
以上峰图和胶图可见，Ni Chromstar Excel较FF相比，能够耐受100 mM EDTA，一步捕获纯度达到90%，性能表现优异，洗脱后层析柱较使用前无颜色变化。
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